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说说蛋白质聚集体可以做哪些检测呢

更新时间:2021-06-28      点击次数:1608
  蛋白质聚集体是蛋白类药物研发和商业化过程中一个重要的挑战之一。聚集体在蛋白质产品开发和生产过程的所有阶段都可以观察到,如蛋白表达、纯化、冻干等。可能对产品的质量和功效有显著的负面影响,其通常会减弱蛋白生物活性。此外蛋白聚集体可能存在潜在增强免疫原性的风险。
 
  蛋白质聚集体的积累是许多神经退休性疾病的共同病理特征,并且与老化也密切相关。然而我们还不了解聚集体是怎样形成和如何清除的;以及在它们的清除中,分子伴侣、蛋白酶和其它调控因子的复杂网络是怎样形成的。
 
  很多研究运用有力的干扰,比如热休克或蛋白酶抑制产生聚集体。然而这些压力是非常强的而且是非特异性的,会引起全局细胞应激反应和无关蛋白聚集。另外有人运用对polyQ融合突变的亨廷顿蛋白的遗传干扰进行聚集体研究。尽管有较高的特异性,但这些系统显示对于聚集开始的时间和聚集形成的程度控制性很差。
 
  蛋白质聚集体的检测
 
  1.可溶聚集体
 
  最小的可溶聚集体是二聚体,可溶聚集体的大小上限则因蛋白质和溶液条件而异。这些可溶的蛋白聚集体,无论是通过物理相互作用还是化学修饰,通常可以用SEC-HPLC检测。该方法的局限在于样品在层析柱中的稀释可能会导致聚集体的解离、不同蛋白质需要不同的流动相、同时流动相或高压也可能会诱导蛋白质形成聚集体。
 
  除此之外,其他的一些可以检测蛋白质聚集体的方法有原位动态光散射、原位静态光散射、分析超离心法、原子力显微镜、石英晶体微天平、电喷雾-差分电迁移率分析等。
 
  2.不可溶聚集体
 
  一般来说,不可溶聚集体包括亚可见微粒(<100μm)和各种形式的可见聚集体或颗粒。可见颗粒体/聚体的形貌取决于聚集机制和或实验条件(如溶液pH)。
 
  传统的检测亚可见微粒的方法是光屏蔽法,但其在检测半透明颗粒和特征尺寸小于2μm的颗粒方面能力有限。流动成像分析因为其高的灵敏度、形态信息及可区分某些类型的颗粒而被广泛应用于聚集体的检测。

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